D'genomesch Sequenze vun de meeschte Viren sinn bekannt.Nukleinsäure Sonden déi kuerz Segmenter vun DNA sinn entworf fir mat komplementäre virale DNA oder RNA Segmenter ze hybridiséieren.D'Polymerasekettenreaktioun (PCR) ass eng méi effizient Technik fir viral Detektioun.Héich Duerchgang diagnostesch Methoden goufen viru kuerzem entwéckelt.
A. Nukleinsäure Hybridiséierungstechnik
Nukleinsäure Hybridiséierung, haaptsächlech dorënner Südblotting (Südlech) an Nordblotting (Nord), ass eng séier entwéckelt nei Technik am Virusdiagnostesche Feld.D'Begrënnung vum Hybridiséierungsassay ass fir kuerz Segmenter vun DNA ze benotzen (genannt "Sonde") entworf fir mat komplementäre virale DNA oder RNA Segmenter ze hybridiséieren.Duerch Heizung oder alkalesch Behandlung ginn duebelstrengeg Zil-DNA oder RNA an eenzel Strécke getrennt an dann op enger zolitter Ënnerstëtzung immobiliséiert.Duerno gëtt Sonde bäigefüügt an hybridiséiert mat der Zil-DNA oder RNA.Wéi d'Sond mat Isotop oder net-radioaktiven Nuklid markéiert ass, kann d'Zil-DNA oder RNA duerch Autoradiographie oder vum Biotin-Avidin-System festgestallt ginn.Well déi meescht vu virale Genome gekloont a sequenzéiert goufen, kënne se mat Virusspezifesche Sequenzen als Sonden am Exemplar festgestallt ginn.De Moment enthalen d'Hybridiséierungsmethoden: Punkt Blot, in situ Hybridiséierung an Zellen, DNA Blotting (DNA) (Southern Blot) an RNA Blotting (RNA) (Northern Blot).
B.PCR Technologie
An de leschte Joeren ass eng Serie vun in vitro Nukleinsäure Amplifikatiounstechnike baséiert op PCR entwéckelt ginn, fir onsensibel oder onkultivabel Viren ze testen.PCR ass eng Method déi spezifesch DNA Sequenz duerch in vitro Polymerase Reaktioun synthese kann.De Prozess vun PCR ëmfaasst eng thermesch Zyklus vun dräi Schrëtt: Denaturatioun, annealing, an Extensioun.dann bei niddregen Temperaturen (37 ℃ ~ 60 ℃), zwee synthetiséiert Nukleotid primers anneal zu der komplementar DNA Segmenter;woubäi bei der entspriechender Temperatur fir Taq Enzym (72 ℃) d'Synthese vun neien DNA Ketten vum Primer 3'end unzefänken mat komplementärer DNA als Template an eenzel Nukleotiden als Material.Also no all Zyklus kann eng DNA Kette an zwou Ketten amplifizéiert ginn.Widderhuelend dëse Prozess, all DNA Kette synthetiséiert an engem Zyklus kann als Schabloun am nächsten Zyklus benotzt ginn, an d'Zuel vun DNA Ketten gëtt an all Zyklus verduebelt, dat heescht datt d'Produktioun vu PCR an enger 2n Loggeschwindegkeet verstäerkt gëtt.No 25 bis 30 Zyklen gëtt d'Produktioun vu PCR duerch Elektrophorese identifizéiert, an déi spezifesch DNA Produkter kënnen ënner UV Liicht (254nm) observéiert ginn.Fir säi Virdeel vu Spezifizitéit, Empfindlechkeet a Komfort ass PCR an der klinescher Diagnostik vu ville virale Infektiounen wéi HCV, HIV, CMV, an HPV ugeholl.Well PCR ganz sensibel ass, kann et Virus DNA um fg Niveau entdecken, d'Operatioun sollt ganz virsiichteg duerchgefouert ginn fir falsch Positiv ze vermeiden.Zousätzlech, positiv Resultat am Nukleinsäure Test heescht net datt et e liewegen infektiivt Virus an der Probe ass.
Mat breet Uwendung vun der PCR Technik ginn nei Techniken a Methoden entwéckelt baséiert op PCR Technik fir verschidden Testzwecker.Zum Beispill kann den Echtzäit quantitative PCR viral Belaaschtung erkennen;in situ PCR gëtt benotzt fir Virusinfektioun an Tissu oder Zellen z'identifizéieren;De nested PCR kann d'Spezifizitéit vum PCR erhéijen.Ënner hinnen ass Echtzäit quantitativ PCR méi séier entwéckelt ginn.Vill nei Techniken, wéi TaqMan Hydrolysesonde, Hybridiséierungssonde, a molekulare Beacon Sonde, goufen an Echtzäit quantitativ PCR Technik kombinéiert, déi wäit an der klinescher Fuerschung benotzt gëtt.Nieft der viraler Belaaschtung an der Kierperflëssegkeet vun de Patienten präzis z'identifizéieren, kann dës Method och benotzt ginn fir Drogen-tolerante Mutanten z'entdecken.Dofir gëtt Echtzäit quantitativ PCR haaptsächlech an der kurativer Effektevaluatioun an der Drogentoleranz Iwwerwaachung applizéiert.
C. High-Throughput Detektioun vu virale Nukleinsäuren
Fir d'Bedierfnesser fir séier Diagnostik vun neien entstanen infektiiv Krankheeten z'erreechen, gi verschidde High-Throughput Detektiounsmethoden, wéi DNA Chips (DNA), etabléiert.Fir DNA Chips gi spezifesch Sonden synthetiséiert a befestegt u klenge Siliziumchips a ganz héijer Dicht fir DNA Sonde Mikroarray (DNA) ze bilden déi mat Probe hybridiséiert kënne ginn.D'Signal vun der Hybridiséierung kann duerch konfokalem Mikroskop oder Laserscanner ofgezeechent ginn a weider vum Computer veraarbecht ginn an en enormen Datesaz betreffend verschidde Genen ka kritt ginn.Et ginn zwou Aarte vun DNA Chips.De "Synthesechip" ass wéi folgend: déi spezifesch Oligonukleotiden ginn direkt op de Chips synthetiséiert.En aneren ass DNA Pool Chip.Déi gekloont Genen oder PCR Produkter ginn uerdentlech op der Rutsch gedréckt.De Virdeel vun der DNA Chip Technologie ass déi gläichzäiteg Detektioun vun enger enormer Quantitéit un DNA Sequenzen.Déi lescht Versioun vum Pathogenerkennungschip kann iwwer 1700 mënschlech Viren gläichzäiteg identifizéieren.DNA Chip Technologie huet d'Problemer vun traditionelle Nukleinsäure Hybridiséierungsmethoden geléist an huet ganz breet Uwendungen an der viraler Diagnostik an der epidemiologescher Studie.
Post Zäit: Dezember-23-2020